Aplicação HPLC | Separação de bases de pirimidina e purina no modo HILIC

A separação dos compostos escolhidos entre as bases de purina e pirimidina foi estudada usando cromatografia de interação hidrófila (HILIC).

A retenção dos analitos foi estudada variando ACN%, concentração de formato de amônio, pH e temperatura da coluna.

Os resultados obtidos confirmaram a ordem de eluição de nucleobases e nucleósidos sobre a sua hidrofobicidade.

Parâmetros do método

Column	Eurospher II 100-5 HILIC, 150 x 3 mm
Phase	Eurospher II 100-5 HILIC
Conditions	Eluent: A: 5 mM Ammonium acetate pH 4.3 B: Acetonitrile Gradient: Isocratic 80 % B Flow rate: 0.6 ml/min Temperature: 25 °C Volume: 1 µL
Detection	UVD 2.1L with 10 mm flow cell: 254 nm, 20 Hz, 0,5 s
Substances	3,5- Di-tert-butyltoluene (9.2 mg/ml) dead time marker, Adenine (0.15 mg/ml), Cytosine (0.20 mg/ml), Uracil (0.14 mg/ml)
Chromatogram	1. 3,5- Di-tert-butyltoluene \| (9.2 mg/ml) 2. Uracil \| (0.14 mg/ml) 3. Adenine \| (0.15 mg/ml) 4. Cytosine \| (0.20 mg/ml)