Sempre tem alguma coisa para purificar!
É ai que o HPLC preparativo entra na jogada.
Parece familiar?
Uma substância precisa ser purificada. Pode ser, por exemplo, um componente de um extrato natural que precisa ser isolado ou um produto final de uma síntese que precisa ser limpo de subprodutos que poderão ser um problema.
Qual método é mais apropriado?
Você deixa essa pergunta para outros responderem ou você se responsabiliza pela purificação do produto?
A cromatografia líquida é um processo de separação extremamente versátil e é ideal para purificar uma grande gama de mistura de substâncias com um alto rendimento e pureza.
O que é importante se o HPLC for usado preparativamente?
Quais componentes do sistema são necessários?
Saiba mais sobre HPLC preparativo, uma ferramenta de conversão muito prática e conheça um sistema ideal para você começar, que pode crescer com você à medida em que você precisar.
Como chegar à cromatografia líquida preparativa?
No cenário analítico, é importante que se identifique a maior quantidade de componentes da amostra quanto possível e/ou se determine sua concentração, enquanto no caso preparativo frequentemente só um ou poucos produtos com um requerimento de pureza específica precisa ser obtido.
Um volume de injeção tão grande quanto possível e um consumo de solvente tão baixo quanto possível são as variáveis importantes em um trabalho em escala preparativa.
HPLC Analítico e Preparativo compar
HPLC Analítico | HPLC Preparativo |
| Objetivo da separação: tantos picos quanto possíveis, separados da linha de base | Objetivo da separação: interessados somente no pico da substância-alvo |
| Volume de amostra: tão pequeno quanto possível (1 a 20 µl por injeção) | Volume de amostra: tanto quanto possível sem sobreposição de pico > 20 µl |
| Diâmetro interno da coluna: 1 a 4 mm | Diâmetro interno da coluna: > 4 mm |
| Tamanho de partícula: Vazão: 1,0 ml/min | Tamanho de partícula: > 5 µm Vazão: 5 a 5000 ml/min |
| Detecção: tão sensitivo quanto possível | Detecção: monitoramento, saturação pode ser problemática |
| Formato de pico: gaussiano para poder ser analisado | Formato de pico: não importa, desde que o pico do produto esteja limpo |
| Coleta de frações: não | Coleta de frações: sim (automatizada) |
| Custo de solvente: baixo | Custo de solvente: alto |
| Recuperação de solvente: não | Recuperação de solvente: desejável, reciclagem |
| Gradiente: otimiza a separação e aumenta a velocidade | Gradiente: interfere com a reciclagem do solvente |
Que tipo de equipamentos são necessários?
Com seu sistema de HPLC você irá precisar de um aparato para coleta dos picos eluídos. Este aparato pode ser um coletor de frações para fracionar uma corrida inteira ou uma válvula de seleção múltipla multi-portas e multi-posições que tipicamente seleciona de 6 a 16 posições, e que também é mais eficiente em termos de custo. Quando você planejar o número de posições necessárias para sua coleta de frações em uma válvula, reserve pelo menos uma para a reciclagem de solvente e uma para o descarte. É melhor ainda, apesar de mais caro, uma válvula adicional.
Ajustando ou aumentando a escala do método do HPLC
A forma mais fácil de aumentar a escala do método de separação é ter um método isocrático. Pense já no desenvolvimento do método no HPLC na economia de solvente e tente não trabalhar com acetonitrila. Etanol ou metanol são bem mais baratos. Além disso, tente trabalhar com um aumento de escala linear, onde só uma mudança no diâmetro da coluna seja mudado. Nesse modelo, o mesmo comprimento de coluna e tamanho de partícula.
Agora chegou a vez da purificação por HPLC…
O sistema preparativo compacto AZURA® oferece uma introdução perfeita para o HPLC semi-preparativo.Com uma bomba isocrática para fluxos máximos de até 50 ml/min e injeção manual, até centenas de miligramas de amostra podem ser limpas por corrida. O sistema vem com um detector UV de comprimento de onda variável. A coleta das frações é disparada pelo sinal do detector através da válvula multi-posições de 12 portas. Assim como todos os outros componentes, é controlado pelo software fácil de usar PurityChrom®.
Muito compacto, diversos sistemas podem ser empilhados
Detector UV de comprimento de onda variável
Outros detectores como RID ou MS podem ser combinados no sistema
… com boas oportunidades para atualização
O sistema compacto pode passar facilmente por um upgrade para o Sistema Preparativo Piloto com um fluxo de 220 ml/min, capacidade de gradiente ternário, coletor de frações opcional X-Y e/ou um drive de válvula adicional para injeções automáticas. Sua aplicação determina sua forma de trabalho!
Entre em contato conosco para obter mais informações do HPLC Prepativo Compacto AZURA® e outros sistemas de HPLC preparativos.
Você sabia?
Quando a KNAUER descontinua um aparato, nós continuamos a oferecer as peças de reposição e suporte por mais 7 anos ainda – se possível até mais tempo, dependendo dos nossos estoques. Manuais e documentações estão disponíveis online.
