Bomba HPLC / UHPLC | Gradiente de alta ou baixa pressão?
A escolha da bomba hplc, tecnologia responsável pela formação de gradiente, é essencial para um sistema HPLC ou UHPLC.
Os sistemas AZURA da Knauer, podem ser equipados tanto com uma bomba de gradiente de alta (HPG) quanto de baixa pressão (LPG). Ambas técnicas tem vantagens e desvantagens.
Uma bomba de gradiente de baixa pressão (LPG – low pressure gradient), também chamada de bomba quaternária, compõe o eluente na entrada do cabeçote da bomba, ou seja, na zona de baixa pressão do sistema, através da rápida mudança na válvula seletora entre os diferentes canais do solvente.
A tecnologia da bomba AZURA P 6.1L se adapta ao volume do misturador e, de acordo com esse volume, muda o tempo de ciclo da válvula. Neste tipo de bomba, é muito importante que exista um degaseificador.
No sistema Knauer AZURA, o degaseificador é padrão e embutido no sistema, bem próximo ao cabeçote da bomba, evitando que as bolhas de ar se misturem novamente antes de serem bombeadas para o sistema.
O investimento na bomba LPG é menor e quatro canais estão disponíveis para se trabalhar, sendo muito utilizados inclusive para deixar um dos canais com a solução para lavagem do sistema no final de uma longa corrida, por exemplo. Esse tipo de configuração é a mais comum nos laboratórios de controle de qualidade das indústrias farmacêuticas e veterinárias de todo o mundo.
Detalhe do gráfico de uma das rampas de mistura LPG: mistura dependendo do volume do misturador
– Misturador 100 uL
– Misturador 50 uL
– Sem misturador
Um pequeno volume de misturador irá melhorar o volume morto do sistema, mas irá diminuir a eficiência de mistura.
O eluente em um gradiente de alta pressão (HPG – high pressure gradient), também chamada de bomba binária, é composto através da combinação do fluxo de solventes provindos de duas bombas. Sistemas que utilizam bombas de gradiente de alta pressão são considerados otimizados, pois possuem um baixo volume morto e gradientes mais rápidos.
Isto é especialmente importante quando estamos falando de análises de UHPLC. Nesse tipo de sistema, é importante que se note que há uma contração no volume total após a mistura dos eluentes em alta concentração, de aproximadamente 4%, dependendo dos solventes envolvidos.
Isso não acontece na bomba de baixa pressão, já que a mistura ocorre antes da bomba. Outro fator que deve ser levado em consideração é que em uma vazão baixa, por exemplo de 0,1mL/min, quando se trabalha com um gradiente de 90/10, os 90 uL são bombeados por uma bomba e 10 uL por outra bomba. Estamos trabalhando nesse último caso no limite de erro da bomba, gerando uma maior pulsação nesse caso.
| LPG | HPG |
| Baixo investimento | Gradientes muito rápidos |
| Mistura de 4 canais | Menor volume morto |
Para qualquer uma das configurações, a Knauer oferece:
- Um filtro de diâmetro de 2 um já acoplado após a bomba, que protege a coluna de possíveis contaminações;
- Um mecanismo de lavagem do pistão (backflush), que lava os contaminantes para aumentar a vida útil dos selos da bomba;
- Degaseificador online: reduz o ruído da linha de base , permitindo maior sensibilidade. Além disso, ele é o mais próximo possível ao cabeçote da bomba, evitando que as bolhas se misturem novamente ao eluente;
- Válvula seletora: mistura precisa de até 4 eluentes;
- Misturador AZURA: misturador de solventes de alta eficiência, disponíveis em diferentes volumes (50/ 100/ 200 uL), permitindo a melhor adaptação para qualquer aplicação ou vazão.
